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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性測(cè)試盒操作程序

更新時(shí)間：2021-04-08      瀏覽次數(shù)：1037

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性測(cè)試盒操作程序
測(cè)定意義：線粒體復(fù)合體Ⅳ又稱細(xì)胞色素C氧化酶，也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負(fù)責(zé)催化還原型細(xì)胞色素C的氧化，并最終把電子傳遞給氧，生成水。

測(cè)定原理：還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收，線粒體復(fù)合體Ⅳ催化還原型細(xì)胞色素C生成氧化型細(xì)胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅳ酶活性。

需要的儀器，耗材:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣本處理
1. 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞，加入 1.0 mL 提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。4 ℃ 600g 離心 10min。

2. 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000g 離心 15min。

3. 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅳ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。

4. 在沉淀中加入 400uL 提取液，超聲波破碎（功率 20%，超聲 5 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 15 次），用于復(fù)合體Ⅳ 酶活性測(cè)定，并且用于蛋白含量測(cè)定。

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